在蛋白质研究中，脱盐是纯化流程中的关键环节。Viskase透析袋凭借其选择性渗透性、化学稳定性和操作便捷性，成为实验室脱盐的工具。本文结合标准化操作流程与常见问题解决方案，为科研人员提供系统指导。 一、标准化操作流程
（一）材料准备与预处理
透析袋选择
根据目标蛋白分子量选择截留分子量（MWCO）匹配的透析袋。例如，目标蛋白分子量6000道尔顿时，需选用MWCO 3500-8000的透析袋。Viskase提供31-1000KD CE膜即用型产品，出厂前已完成化学清洗与质检，可直接使用。
透析袋预处理
传统型透析袋：剪取所需长度（通常为样品体积的2-3倍），置于50%乙醇中煮沸1小时，依次用0.01mol/L碳酸氢钠、0.001mol/L EDTA溶液清洗，最后用蒸馏水冲洗3次。
即用型透析袋：取出后直接浸泡于目标缓冲液中平衡15-30分钟，去除可能残留的保护剂。
（二）装样与密封
样品装载
使用移液器将待脱盐蛋白溶液注入透析袋，避免液体溢出。装样量不超过透析袋容积的2/3，防止膨胀破裂。
密封处理
用专用夹子或绑带封闭透析袋两端，确保密封性。密封后挤压透析袋，检查是否有液体泄漏。若发现气泡逸出，需更换新透析袋。
（三）透析条件控制
透析液选择
通常使用去离子水或目标缓冲液（如PBS）。若需置换缓冲体系，需分步进行：先透析至低盐缓冲液，再逐步调整至目标条件。
透析参数设定
时间：根据盐浓度和样品量调整，通常为6-24小时。高盐样品需延长至48小时，并每4-6小时更换透析液。
温度：常规实验在4℃进行，以维持蛋白稳定性；对热稳定蛋白可在室温（25℃）下操作。
搅拌：使用磁力搅拌器以50-100rpm速度搅拌透析液，消除膜外浓度梯度，提高脱盐效率。
（四）脱盐效果验证
纳氏试剂检测
取透析外液1ml，加入纳氏试剂，若溶液呈黄色，说明仍含铵盐，需继续透析；若为无色，则脱盐完成。
电导率监测
使用电导率仪实时监测透析液电导率，当数值稳定且接近去离子水水平时，表明脱盐达标。
二、避坑指南与常见问题解决方案
（一）透析袋破损问题
原因：机械损伤、预处理不当或MWCO选择过小。
解决方案：
操作时轻拿轻放，避免尖锐工具接触透析袋。
根据蛋白分子量选择MWCO，通常为目标分子量的1.5-2倍。
预处理后用蒸馏水充分冲洗，去除残留杂质。
（二）脱盐效率低下
原因：透析时间不足、透析液更换不及时或膜表面积不足。
解决方案：
延长透析时间至24-48小时，并每4-6小时更换透析液。
增加透析袋长度或使用多袋并联，扩大膜表面积。
采用连续循环透析装置，通过棉线引导透析液流动，加速小分子扩散。
（三）蛋白活性损失
原因：透析液pH或离子强度不适配，或操作过程中蛋白变性。
解决方案：
预平衡透析袋时使用与蛋白储存液成分相近的缓冲液。
避免使用强酸、强碱或高浓度变性剂（如8M尿素）作为透析液。
对热敏感蛋白，全程在4℃下操作，并添加蛋白保护剂（如0.1%BSA）。
（四）透析袋重复使用风险
原因：残留蛋白或杂质影响后续实验。
解决方案：
仅对低价值样品或预实验使用重复透析袋。
重复使用前需用1%SDS溶液煮沸30分钟，再用蒸馏水冲洗。
避免重复使用处理过强腐蚀性样品的透析袋。
