酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA）作为一种广泛应用的免疫检测技术，在临床诊断、疾病研究、食品安全检测以及环境监测等多个领域发挥着至关重要的作用。其核心是利用抗原-抗体特异性结合的原理，并通过酶促化学反应将这种结合转化为可定量或定性测量的信号。根据实际检测需求的不同，
ELISA试剂盒的设计呈现多样化的特点，包括但不限于双抗体夹心法、间接法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体以及应用亲和素-生物素系统的ELISA等。
1.双抗体夹心法（Sandwich ELISA）
在双抗体夹心法中，首先将针对目标抗原的捕获抗体固定于固相载体上形成固相抗体层，然后加入待测样本使得抗原与固相抗体结合。洗涤去除未结合的成分后，再加入能与抗原另一表位结合的酶标抗体。经过进一步的温育和洗涤步骤，最后通过酶催化底物反应生成有色产物，颜色深浅与样本中的抗原含量成正比，从而实现定量分析。
2.间接法ELISA
间接法ELISA中，固相载体上的抗体同样用于捕获抗原，但后续步骤有所不同。此处不是加入酶标抗体，而是先加入待测样本并允许抗原与抗体结合后，再添加酶标记的抗体（通常为抗物种抗体），它与样本中的抗体结合而非直接与抗原结合。这种方法的优势在于它可以检测多种类型的抗体，但由于增加了步骤，可能面临交叉反应和背景较高的风险。
3.竞争法ELISA
竞争法ELISA中，待测样本和酶标记的抗原同时与有限的抗体结合。样本中的抗原和酶标抗原竞争结合同一个抗体位点，因此，样本中抗原浓度越高，结合到固相抗体的酶标记抗原就越少，最终产生的颜色强度越弱。此法适用于测定小分子抗原或多肽类物质。
4.双位点一步法ELISA
在这种设计中，抗原和酶标抗体预先偶联形成复合物，然后一起加入到固相抗体预包被的板孔中。如果待测样本中含有相同抗原，则会竞争结合固相抗体，导致酶标抗原-抗原复合物的结合减少。随后的酶催化反应及显色步骤可用于定量分析。
5.IgM抗体捕获法
专门用于检测IgM类抗体的捕获法，通过固相包被抗人IgM抗体，使样本中的IgM首先结合到固相上，之后加入抗原以捕获与IgM特异性结合的部分，再通过酶标抗体检测。此法特别适合于急性感染早期的IgM抗体检测。
6.亲和素-生物素系统（ABC-ELISA）
利用亲和素对生物素很高的亲和力，可以将生物素标记到抗体或抗原上，而酶则标记在亲和素上。这样既简化了标记步骤，又提高了灵敏度和特异性。
制作工艺
-抗原或抗体的纯化与标记：选择合适的抗原或抗体，通过物理、化学或生物方法进行纯化，并将其与酶（如辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶AP）或其他标记物（如生物素）共价连接。
-固相包被：将标记好的抗体或抗原均匀地固定在塑料微孔板或其他固相载体表面，形成稳定的固相层。
-试剂配制与质量控制：制备标准曲线所需的已知浓度的标准品、洗涤液、酶标抗体溶液、底物溶液以及终止液等，并对每批试剂盒进行严格的质量控制和性能验证。
-封装与保存：将各组分分装至专用试剂瓶或管中，按照适宜条件密封保存，确保试剂盒的稳定性和有效性。
ELISA试剂盒的设计与制作工艺复杂且精密，每一种方法都需要精心设计以满足特定的检测需求，从抗原抗体的选择与标记，到固相载体的处理，再到整套试剂盒的生产和质量控制，每一个环节都对检测结果的准确性和可靠性产生直接影响。
