Pfu DNA Polymerase DNA聚合酶/Pfu DNA 聚合酶 500u

更新时间：2014-05-19 点击次数：814次

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Pfu DNA Polymerase

规格：500U

浓度：5U/ul

保存：-20℃保存, 有效期至少一年。

产品简介：

Pfu DNA Ploymerase 是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化

分离出来的重组蛋白，其分子量为90kD。由于Pfu 酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能纠正DNA 扩增过程中

产生的错配，而传统的Taq 酶却不能，其它耐热DNA Polymerase 如Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等虽具有校

正功能，但Pfu 酶是目前已发现的所有耐热DNA Polymerase 中出错率zui低的。Pfu 酶无5’→3’核酸外切酶活性，

PCR 反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/min，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍保持

90%以上的活性，对于GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。Pfu 酶的PCR 产物为

平末端，可加A 处理再与T-载体连接或使用平末端克隆载体。

活性定义：

1 单位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定义为在74℃，30 分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/

引物，将10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：

SDS-PAGE 检测Pfu DNA Polymerase 纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余

DNA；能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

酶贮存缓冲液：

50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol；其他成份。

适�9�2范围：

用于DNA 的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析（SNP）和末端补平

等。

建议PCR 体系（以50μl 反应体系为例）

Template <0.5μg

上游引物（10μM） 1μl

下游引物（10μM） 1μl

10×Buffer（含Mg2+） 5μl

dNTP（各2.5mM） 4μl

Pfu DNA Polymerase 0.5-1μl

ddH2O up to 50μl

注意事项：

1、PCR 反应体系加样时，zui后一步加入Pfu DNA Ploymerase，整个过程宜在冰上操作。

Solarbio

Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

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2、取Pfu DNA Ploymerase 做PCR 反应时，请用高压灭菌处理过的吸头。

3、10×Pfu Buffer 中含20 mM Mg2+，如PCR 反应需要较高Mg2+浓度，请另行加入。

4、用Pfu 酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18 个碱基，Tm值在55-80℃之间，引物浓度在0.1-0.5uM

之间，比Taq 酶略高。