还原型谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒检测原理与方法

检测原理与方法

试剂盒采用DTNB比色法(终点法)检测还原型谷胱甘肽含量，其核心原理是基于DTNB(埃尔曼试剂)与还原型谷胱甘肽的巯基反应生成黄色TNB发色团，通过测定412nm处的吸光度实现定量分析。具体反应过程如下：

1. 样本处理：

◦ 组织样本：按照组织质量(g)：试剂一体积(mL)=1:5-10的比例进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10分钟，取上清液

◦ 细胞样本：按照细胞数量(10^4个)：试剂一体积(mL)=500-1000:1的比例进行超声破碎，8000g，4℃离心10分钟，取上清液

◦ 液体样本(血清、血浆等)：直接使用，无需匀浆处理

2. 反应体系构建：

◦ 在微量玻璃比色皿或96孔板中，依次加入20μL样本上清液和140μL试剂二，混匀静置

◦ 再加入40μL试剂三(DTNB)，混匀静置2分钟

◦ 在412nm波长处测定吸光度值(A)，与标准曲线进行比较，计算样本中GSH含量

3. 定量计算：

◦ GSH含量计算公式：GSH(μmol/L) = (A2 - A1)/斜率，其中A2为样本吸光度，A1为空白对照吸光度，斜率为标准曲线斜率

◦ 按蛋白浓度计算：GSH(μmol/mg prot) = (A2 - A1)/斜率 × V样/V样总 ÷ Cpr，其中Cpr为上清液蛋白质浓度(mg/mL)

◦ 按样本质量计算：GSH(μmol/g鲜重) = (A2 - A1)/斜率 × V样/V样总 ÷ W，其中W为样本质量(g)

◦ 按细胞数量计算：GSH(μmol/10^6 cell) = (A2 - A1)/斜率 × V样/V样总 ÷ 细胞数量，其中细胞数量以10^6为单位计量

4. 检测参数：

◦ 检测方法：微量法/分光光度法

◦ 检测波长：412nm

◦下限检出限：3.763μg/mL

◦ 线性范围：12.5-400μg/mL

◦ 适用样本：组织、细胞、血清、血浆等

◦ 操作时间：约30分钟(含样本处理)

◦ 规格：100T/96S或200T/192S