实验中为了确定信号和背景应将捕获抗体（0.5-4μg/ml）和检测抗体（0.25-2μg/ml）在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按
Elisa试剂盒说明书常规提供的范围进行操作。对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。
在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批Elisa试剂盒说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。为了优化灵敏度，建议过夜孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
Elisa试剂盒的蜕变其实是比较常见的一个问题，哪些因素会导致蜕变呢？
1.办法学的影响，ELISA测定形式包含以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法，其间竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等选用)因受操作时差所引起的竞争等要素的影响，成果重复性较差，质量较难操控。
2.试剂要素，不同批次的ELISA试剂在制作进程中很难保证质量*一致，即使是通过批批检的项目其检测成果也存在差异，因而必须挑选和订购长批号的试剂，并保证保存条件。严格执行这一规范可以防止因试剂批号改动而从头建立质控体系及从头评估试剂的杂乱进程，并且能够保证成果的稳定性；关于效期短、使用率低的试剂，应当小量分装，每次使用则取分装部分即可，防止重复冻融造成试剂的失效。
3.样本要素，标本搅扰要素包含内源性搅扰要素和外源性搅扰要素，前者包含类风湿因子、补体、异嗜性抗体、本身抗体、溶菌酶等，后者包含标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时刻过长、标本凝结不全、冷冻标本的重复冻融等。
4.操作要素，Elisa试剂盒操作步骤杂乱，操作不当将引起较大的差错。加样、温育、洗刷、显色、比色。
5.灰区的设置，通常情况下，ELISA定性试验以“阳性”和“阴性”来报告成果，两者间有一条分界线被称为“阳性判别值”(cut-off value，CO值)，这是定性免疫测定成果报告的根据。
6.标本复查，手工检测进程杂乱，影响要素较多，即使室内质控在控，也或许因孔间差异而造成成果的差异，因而加大复查力度是保证成果准确性的牢靠办法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及罕见形式的检测成果进行复查。
