NEB内切酶已经成为分子生物学研究*的工具之一,在分子克隆、基因分型、遗传突变研究和测序等等方面应用广泛,是一种高保真热稳定型连接酶,由 DNA 连接酶和试剂混合而成。该酶能高保真且连接 DNA 切刻位点,其保真性没有任何酶能与之相比。在优化的缓冲液体系中,该酶将具有5´-磷酸基和3´-羟基的切刻位点以磷酸二酯键进行连接,极大程度降低了错配率。改良的配方使得该产品可以更好的识别连接反应供体和受体,从而可以检测 SNPs 和其他等位基因变异。
NEB内切酶反应条件:
1、1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
2、[50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP]。推荐 DNA 5? 末端浓度为 0.1-1.0 μM,16℃ 温育。
3、热失活:65℃ 10 分钟。
NEB内切酶注意事项:
1、与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。
2、稀释后的 T4 DNA 连接酶应于 -20℃、50% 甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液 A,NEB #B8001)中保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。
3、只要在反应体系中补加 1 mM ATP,连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液或在T4 DNA 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。
对于供应商而言,NEB内切酶供应是一个相对而言稳定有利的市场,这是因为所需的研发以及工艺过程的经费较少,而且这个*每一个百分点的涨落都会带来意料不到的收益。