NEB内切酶并不兼有甲基化酶的活性。细胞内可另有独立的甲基化酶,它切断DNA时不需ATP,也不需SAM。它的切点是严格的,而且就在识别顺序之中。Ⅱ型的酶在蛋白质组成上比Ⅰ型、Ⅲ型要简单的多,它只有单一的亚基,以二体或四体发挥作用。有的酶要5或 7个甚至更长的识别顺序。识别顺序短的在DNA分子上出现的几率多,酶可把DNA分子切成较多的小片段识别顺序长的则往往只切出少数大片段。这些酶切片段统称为限制性片段。用传感器感知外界环境、分析外界条件,然后通过适当的方式来理解环境,对于工作在复杂或非常规化环境中的自主式AGV,要进一步提高其自主判断能力,依靠自身模式识别及障碍物识别,实现正常工作。
在PCR产物两端设计一定的限制酶切位点,经NEB内切酶切后克隆至用相同酶切的载体中。但实验证明,大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断。必须在酶切位点旁边加上一个至几个保护碱基,才能使所定的限制酶对其识别位点进行有效切断。酶切位点(内切酶的识别序列)要加在引物端,为保证PCR产物能被限制性内切酶的识别且有效的酶切,一般在引物的端酶切位点侧边加上保护碱基。